Hola amigos taringueros!!!
Hoy les traigo la PCR(reaccion en cadena de la polimerasa).
Les comento como viene el post. Primero les hago un resumen de lo que es la PCR y para que sirve(dedicado a los q no le gusta leer mucho), despues les dejo lo que es la pcr con lujo de detalles, luego una animación flash para que uds mismos hagan la PCR(como dice el titulo del post) y por ultimo algunos videos didacticos. Ahi va:
RESUMEN:
---¿Qué es la PCR? La reaccion en cadena de la polimerasa es una tecnica utilizada en laboratorios de bioquimica, genetica, etc. que sirve para amplificar(aumentar la cantidad) de un fragmento de ADN.
---¿Que sustancias necesita?
1) Buffer
2) DNA molde(el que quiero amplificar)
3) Cebadores o primers(secuencias de DNA complementario)
4) Desoxinucleotidos(dNPTs)
5) Enzima: Taq polimerasa
---¿Como se realiza?
Se introducen estas sustancias en un tubo. Este se coloca en un TERMOCICLADOR.
Primero se calienta el tubo a una temperatura de 95ºC. A esta T se desnaturaliza el ADN que se quiere amplificar y se abre en dos hebras.
Luego se desciende la temperatura hasta 52ºC para que se unan los cebadores a la hebra de DNA molde.
Por ultimo se eleva la temperatura hasta 72ºC para que la Taq polimerasa se una y genere la hebra complementaria.
Este ciclo de 3 pasos se repite cerca de 30 veces y se obtiene un billón de veces el fragmento de DNA a amplificar.
EXPLICACION CON DETALLE(abajo esta el link):
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas iniciales en inglés son PCR ("polymerase chain reaction" ), es una técnica que fue desarrollada por Kary Mullis a mediados de los años 80. Con esta metodología se pueden producir en el laboratorio múltiples copias de un fragmento de ADN específico, incluso en presencia de millones de otras moléculas de ADN. Como su nombre indica, se basa en la actividad de la enzima ADN polimerasa que es capaz de fabricar una cadena de ADN complementaria a otra ya existente. Sus únicos requerimientos son que existan nucleótidos en el medio que son la materia base para fabricar el ADN (los nucleótidos de adenina, timina, citosina y guanina), y una pequeña cadena de ADN que pueda unirse a la molécula que queremos copiar para que sirva como cebadora (el cebador, en inglés "primer" ).
La reacción en cadena de la polimerasa se desarrolla en tres pasos. El primero es la separación de las dos cadenas que forman la molécula de ADN que se quiere amplificar, para lo cual se debe calentar el ADN a altas temperaturas que pueden ser próximas a la ebullición. Cada una de estas cadenas actuará como molde para fabricar su complementaria. A continuación se baja la temperatura para conseguir que cada cebador se una a su región específica dentro de la cadena de ADN. El último paso consiste en la generación de la cadena de ADN complementaria por acción de la ADN polimerasa. El problema con el que se encontraron los científicos que idearon esta técnica es que es preciso aumentar la temperatura de la mezcla de reacción hasta valores por encima de los 70°C para que las dos cadenas de ADN se separen. A estas temperaturas tan elevadas la ADN polimerasa se inactivaba y era preciso añadirla de nuevo en cada ciclo. Esto fue así hasta que se descubrió la bacteria Thermus aquaticus que vive en aguas termales y cuya ADN polimerasa (Taq polimerasa) es capaz de trabajar a temperaturas superiores a los 70°C. De esta manera sólo hay que añadir la enzima al inicio del proceso de reacción y llevar a cabo tantos ciclos como sea necesario. Cada una de las moléculas de ADN hijas pueden volver a entrar en el proceso y servir como molde para fabricar más copias. Así tras 20 ciclos de reacción se puede obtener hasta 1 millón de copias de una molécula de ADN.
La sensibilidad de la técnica de PCR es muy alta pero presenta algunos inconvenientes, como son que no es una técnica cuantitativa y una relativamente alta probabilidad de obtener falsos positivos por contaminación. Para solventar este último problema se ha de optimizar la secuencia de los cebadores, así como la temperatura precisa para que estos se unan al ADN en la localización correcta y realizar una adecuada manipulación de los reactivos. Por otra parte para solventar el problema de la cuantificación se han generado unas variaciones sobre el esquema inicial de la PCR, dando lugar a lo que se conoce como PCR cuantitativa.
La clave en la PCR cuantitativa es la posibilidad de detectar en tiempo real la amplificación de nuestro genoma de interés. Para llevar a cabo esta detección existen varios métodos pero casi todos basados en la utilización de otro fragmento de ADN (sonda) complementario a una parte intermedia del ADN que queremos amplificar. Esta sonda lleva adherida una molécula fluorescente y otra molécula que inhibe esta fluorescencia ("quencher" ), de tal forma que sólo cuando la sonda es desplazada de su sitio por acción de la ADN polimerasa la molécula fluorescente se libera de la acción del "quencher" y emite fluorescencia al ser iluminada con un láser. La cuantificación de la fluorescencia emitida durante cada ciclo de la PCR será proporcional a la cantidad de ADN que se está amplificando. En general para que sea válida esta técnica requiere realizar en paralelo una curva patrón en las mismas condiciones para conocer la cantidad total de ADN que se está amplificando.
La técnica de la PCR ha sido vital para la secuenciación del genoma humano, así como de todos los otros genomas secuenciados hasta el momento. Además, actualmente existen muchas versiones comerciales de test basados en PCR para detectar agentes infecciosos como Chlamydia trachomatis, el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) que causa el SIDA, Mycobacterium tuberculosis, y otros muchos. El desarrollo de esta tecnología está siendo aplicado también en la exploración de enfermedades genéticas (ej. la anemia de células falciformes o la fibrosis quística), en pruebas para el cáncer (ej. para detectar recaídas tempranas), y para determinar si dos individuos son compatibles genéticamente de cara a un trasplante. La llegada de la PCR cuantitativa promete un gran avance en estos test clínicos y de diagnóstico.
ANIMACION FLASH: HACE LA PCR!!!
Por ahí se les complica un poco con el ingles(a los que no leyeron lo de arriba ja), pero igual es facíl. Lo saque de la pagina de la Universidad de Utah.
link:
VIDEOS RELACIONADOS:
LA CANCION DE LA PCR:
Ese video la rompe, deberia ser un hit ajja.
Y si les gusto ese video, aca va otro muy divertido:
Como verán no soy muy bueno redactando, peo hago lo que puedo. Espero que les guste, que les sirva y que lo hayan disfrutado. En estos dias subo mas cositas, me pueden seguir que no muerdo .
Un fuerte abrazo!!!!